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唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗解決方案

發(fā)布時間：2020-09-10      瀏覽次數(shù)：12356    分享：

       今年8月，廣東省一家腸粉店發(fā)生食物中毒，11名顧客吃了店內(nèi)河粉后，出現(xiàn)嘔吐、腹瀉等癥狀，送醫(yī)后1人搶救無效去世，2人病情較重，其余人員暫無生命危險。

       經(jīng)調(diào)查，這起食物中毒的罪魁禍首是“椰毒假單胞菌”，中毒原因是因為某些菌株可以產(chǎn)生一種叫“米酵菌酸”的毒素，一旦吃了含有這種毒素的食物，就會表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹瀉、頭暈、全身無力，嚴重時會出現(xiàn)黃疸、肝腫大、皮下出血、嘔血、驚厥抽搐等癥狀，最嚴重的會出現(xiàn)休克甚至死亡。

       “椰毒假單胞菌”，全稱椰毒假單胞酵米面亞種Pseudomonas cocovenenans subsp. Farinofermentans，是一種存在于酵米面、變質(zhì)鮮銀耳及其他淀粉類發(fā)酵產(chǎn)品中的食源性致病菌，

       由于椰毒假單胞酵母菌酵米面亞種不是國際公開發(fā)表和承認的細菌分類科學名稱，1999年劃分為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Burkholderia gladioli的一個病原型，目前現(xiàn)行標準GB/T 4789.29-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗 椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗》。2018年9月國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗（征求意見稿）》中，將該菌進行更名，同時新增分離培養(yǎng)基mPDA同PCFA用于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）的分離。

具體檢驗流程如下：

1. 檢驗流程（前增菌以及選擇性分離過程）



2. 檢驗流程初篩實驗

      自選擇性瓊脂平板上分別挑取5個以上典型或可疑菌落，分區(qū)劃線卵黃瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)。挑取培養(yǎng)18～24 h的菌落進行革蘭氏染色及氧化酶試驗。對于革蘭氏染色陰性、氧化酶試驗陰性的菌繼續(xù)培養(yǎng)至48 h±2 h，對于卵磷脂酶陽性，帶有虹彩環(huán)的單個菌落，接種PDA平板，36℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h。


（環(huán)凱貨號027162）卵黃瓊脂（卵磷脂酶試驗）

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌恒溫熒光擴增試劑盒快速檢測法

1. 技術原理：利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶，使模板兩端引物結合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現(xiàn)在恒溫條件下（60~65℃）進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。

2. 產(chǎn)品優(yōu)勢

操作簡便：簡單加樣操作，快速上手；

快速省時：獲得菌液后1 h完成檢測

靈敏度高：最低檢測限8CFU。

特異性強：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性

結果簡單可視：肉眼觀察顏色，可判斷結果。

“+”代表陽性；“-”代表陰性

3. 產(chǎn)品組分：

組分名稱

規(guī)格×數(shù)量

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢測試劑（凍干）

3排× 8管

復溶液

650 μL × 1管

陽性對照（凍干）

1管

陰性對照（凍干）

1管

裂解液

1 mL × 1管

顯色指示劑

80 μL×1管

超純水

1 mL×1管

說明書

1份

4. 過程圖解：

5. 產(chǎn)品結果

“+”代表陽性；“-”代表陰性

相關產(chǎn)品信息

用途

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

快速檢驗和鑒定

KJD16L

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測試劑盒

核酸快速檢測試劑盒

24測試/盒

選擇性增菌

021055

GVC增菌液

250g/瓶

分離培養(yǎng)

021054

改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（mPDA）

250g/瓶

021059

PCFA培養(yǎng)基基礎

250g/瓶

SR0690

PCFA培養(yǎng)基配套試劑

10支/盒

卵磷脂酶試驗

027161

卵黃瓊脂基礎（適應GB4789.29-2003）

250g/瓶

卵磷脂酶試驗

027162

卵黃瓊脂基礎（適應GB4789.29修訂意見稿）

250g/瓶

純培養(yǎng)

021057

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

250g/瓶

形態(tài)觀察

029010

革蘭氏染色液

4種×10mL/盒

氧化酶試驗

029172

氧化酶試劑

50測試/盒

動力試驗和產(chǎn)毒素試驗

021056

馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂

250g/瓶


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