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KJD16L 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法) 24test

英文名稱:Rapid Detection kit for Burkholderia gladioli

貨 號 :KJD16L

規(guī) 格 :24測試/盒

用途:食品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌快速檢測

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商品詳細
說明書
微生物圖冊
行業(yè)應用
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產品名稱:唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱:Rapid Detection kit for Burkholderia gladioli

產品編號與包裝規(guī)格:

編號 規(guī)格
KJD16L24 測試/盒

產品簡介:本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),用于食品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌的快速檢測,可借助顯色指示劑顏色變化直接判讀結果。

檢測原理:利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的 Bst DNA 聚合酶,使模板兩端引物結合處循環(huán)出現環(huán)狀單鏈結構,引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應,實現在恒溫條件下(60~65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑,陰陽性結果顯色差異顯著,可直接通過顏色變化判讀結果。

產品特點:
      1. 快速簡便:將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時減少溶液配制步驟,更為便捷,整個檢測反應可在 1 h 內完成;
      2. 特異性高:利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物,保證擴增反應的高度特異性;
      3. 靈敏度高:最低檢驗限達到 10 CFU/Test;
      4. 判讀簡單:反應前加入顯色指示劑,反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果,直觀方便,且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測試劑盒產品組分:

組分編號 組分名稱 規(guī)格數量
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢測試劑(凍干)3排 × 8管
復溶液650μL × 1管
KJD16L+陽性對照(凍干)1管
陰性對照(凍干)1管
裂解液1mL × 1管
顯色指示劑80μL× 1管
超純水1mL× 1管
 說明書1份

儲存條件與保質期:2~8℃條件下儲存,有效期為 12 個月。

適用儀器:
      1. PCR 儀器或金屬浴恒溫器。
      2. 高速離心機,用于樣品前處理。

樣品類型:增菌液、可疑菌落樣品以及 DNA 樣品等。

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測試劑盒使用指南:

1,樣品前處理

   A. 樣品增菌液模板DNA的制備:
         a) 取 25 g 待檢樣品置于 225 mL PDB 增菌肉湯中,36 ℃±1 ℃增菌 8~12 h。該步驟也可依照實驗室自行建立的方法進行增菌;
         b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min 離心 5 min,完全去除上清;
         c) 加入 30 μL 裂解液充分懸浮管底沉淀,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱 10 min。  
         d) 12000 r/min 離心 15 min,上清即為待測樣品 DNA,靜置冰上,長時間不用應再次離心。

   B. 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落半環(huán)到含 30 μL 裂解液的無菌離心管,充分懸浮后按照上述步驟 c)、d)操作。

2,試劑混合、加樣

   A. 陰、陽性對照復溶:首次使用時,加入 80 μL 超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中,待溶解后混勻,-20℃存儲待用。

   B. 干粉試劑復溶、加樣:
         1) 取出凍干粉試劑,按照需求剪取 n 個檢測試劑管(n=待檢測樣品數+1 管陽性對照+1 管陰性對照),每管加入復溶液 20 μL;
         2) 向上述已加入復溶液的 n 個反應管中各加入顯色指示劑 2.5 μL;
         3) 向上述 n 個反應管中依次分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 2.5 μL,每個加樣后立刻蓋緊蓋子。

3,擴增反應:使用能夠提供恒溫條件的儀器(有熱蓋功能優(yōu)先),設置溫度到 64℃,放入檢測管恒溫反應50 min。

4,結果判讀:反應結束后在自然光線充足的環(huán)境條件下,將樣品置于白色背景下觀察,陰性對照檢測管呈淡橙色,陽性對照檢測管呈熒光綠,待測樣品反應管以此作為對照進行判讀,若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產品技術支持聯系。

LAMP檢測操作指南

LAMP使用方法

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