金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性

生物學(xué)特性：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑0.4～1.2μm，呈葡萄串狀排列；無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞；在陳舊培養(yǎng)物中，衰老的菌體常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。兼性厭氧菌，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4；耐鹽性強(qiáng)，可產(chǎn)黃色色素。

流行學(xué)特征：金黃色葡萄球菌是常見(jiàn)的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當(dāng)?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報(bào)道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的 25%左右，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門(mén)氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。

金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)

第一法：定性檢驗(yàn)

操作注意事項(xiàng)

1：使用均質(zhì)袋進(jìn)行前增菌時(shí)，應(yīng)使用帶有底托的均質(zhì)袋架子，防止培養(yǎng)過(guò)程中前增菌袋子歪倒泄漏污染培養(yǎng)箱；
2：高壓滅菌后，培養(yǎng)基中瓊脂往往會(huì)分層在底部，應(yīng)搖勻使用；
3：金黃色葡萄球菌在血平板上大部分為金黃色，但有時(shí)為白色色，形態(tài)鑒定時(shí)需注意；
4：如果BP平板在培養(yǎng)48小時(shí)后未見(jiàn)金黃色葡萄球菌可疑菌落，應(yīng)挑取非典型菌落進(jìn)行鑒定；
5：金黃色葡萄球菌在BP平板上有時(shí)可見(jiàn)到不分解脂肪的菌株，除每一偶不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。此外，從長(zhǎng)期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，其外觀可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。形態(tài)鑒定時(shí)需特別注意；
6：培養(yǎng)箱中疊放培養(yǎng)皿時(shí)，為防止中間平皿過(guò)熱，高度不得超過(guò)6個(gè)平板；

第二法：平板計(jì)數(shù)法	第三法：MPN法

操作注意事項(xiàng)

1：在進(jìn)行樣本10倍稀釋的過(guò)程中，吸管應(yīng)插入檢樣稀釋液液面2.5cm以下，取液應(yīng)先高于1mL，而后將吸管尖端貼于試管內(nèi)壁調(diào)整至1mL，這樣操作不會(huì)有過(guò)多的液體粘附于試管外。而后將1mL液體加入另一9mL試管內(nèi)時(shí)應(yīng)沿管壁加入，不要觸及管內(nèi)稀釋液晶，以防吸管外部粘附的液體混入其中影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

培養(yǎng)基原理解析

1、7.5%氯化鈉肉湯

? 蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì)；較高含量的氯化鈉提供較高的滲透壓，抑制大多數(shù)非葡萄球菌的微生物。

2、Baird-Parker瓊脂
? 胰蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；丙酮酸鈉和甘氨酸刺激葡萄球菌的生長(zhǎng)；氯化鋰和亞碲酸鉀抑制非葡萄球菌的微生物；含有卵磷脂酶的葡萄球菌降解卵黃使菌落產(chǎn)生透明圈，而脂酶作用則產(chǎn)生不透明的沉淀環(huán)；凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌還能還原亞碲酸鉀而產(chǎn)生黑色菌落。
? 金黃色葡萄球菌在 Baird-Parker平板上呈圓形, 表面光滑、 凸起、 濕潤(rùn)、 菌落直徑為2 mm~3 mm,顏色呈灰黑色至黑色, 有光澤, 常有淺色(非白色) 的邊緣, 周?chē)@以不透明圈( 沉淀) , 其外常有一清晰帶。

金黃色葡萄球菌菌落黑色，周?chē)哂胁煌该魅?，其外有清晰?/span>

3、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基
? 原理：顯色劑與金黃色葡萄球菌具有的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在無(wú)色透明平板上，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生粉紅－紫紅的邊緣整齊菌落；抑菌劑可抑制雜菌的生長(zhǎng)。
? 特點(diǎn)：使用方便，加熱煮溶即可不需高壓滅菌；結(jié)果顏色清楚，結(jié)果一目了然。

4、BHI肉湯
? 胰蛋白質(zhì)胨和牛心浸出液提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；葡萄糖可為多種細(xì)菌提供能源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉為緩沖劑。

5、血平板
? 酪蛋白胰酶消化物、心胰酶消化物、肉胃酶消化物、酵母浸出粉、可溶性淀粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；羊血是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的良好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在45～50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液可以保存血液中某些不耐熱的生長(zhǎng)因子，同時(shí)血球不被破壞。
? 金黃色葡萄球菌菌落為金黃色，菌落周?chē)梢?jiàn)完全透明溶血圈。

 金黃色葡萄球菌黃色或白色菌落，有完全透明溶血圈

HandyPlate 金黃色葡萄球菌測(cè)試片

金黃色葡萄球菌測(cè)試片與3M方法擬合度良好	金黃色葡萄球菌測(cè)試片 金黃色葡萄球菌顯品 - 紫紅色菌落

生化鑒定原理解析

1、血漿凝固酶試驗(yàn)
? 致病性的金葡菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著于細(xì)菌表面，產(chǎn)生凝固。
? 如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽(yáng)性結(jié)果。
? 必須注意，某些菌株在產(chǎn)生的葡激酶在延長(zhǎng)孵育時(shí)間后可使凝塊溶解使之產(chǎn)生假陰性。

金黃色葡萄球菌實(shí)時(shí)熒光PCR快檢法

金黃色葡萄球菌實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增試劑盒

? 技術(shù)原理：基于實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)檢測(cè)目標(biāo)特異性基因片段設(shè)計(jì)引物和熒光探針并優(yōu)化反應(yīng)所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在擴(kuò)增過(guò)程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號(hào)，此時(shí)熒光定量PCR儀可識(shí)別該熒光信號(hào)，同時(shí)根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)，進(jìn)而判定目標(biāo)基因是否檢出。
? 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：快速提取，一步法核酸提取，快速高效，核酸提取效率高；操作簡(jiǎn)單，提供PCR反應(yīng)體系預(yù)混液，直接加樣檢測(cè)，無(wú)需自行配制；特異性強(qiáng)，采用高特異性引物及探針，確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性；靈敏度高，采用高效的擴(kuò)增酶，檢測(cè)靈敏度可達(dá)10-100copies/test。
? 產(chǎn)品組成：

質(zhì)量控制及疑難解析

質(zhì)量控制

1、實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中，每批預(yù)增菌液、選擇性增菌液、分離平板等都要做空白對(duì)照。以掌握檢驗(yàn)過(guò)程中是否存在來(lái)自檢驗(yàn)環(huán)境的污染。

2、定期使用金黃色葡萄球菌ATCC6538或相應(yīng)定量活菌參考品，在P2實(shí)驗(yàn)室或陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，用適當(dāng)?shù)氖称窐悠愤M(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，污染劑量應(yīng)控制在10-100CFU/25g，并進(jìn)行記錄，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)至少每2個(gè)月進(jìn)行1次。

3、每2個(gè)月將所使用的培養(yǎng)基和生化試劑用金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株或陰性菌株進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)行記錄。

疑難解析

問(wèn)：在增菌增菌結(jié)束后，肉湯未見(jiàn)微生物生長(zhǎng)，是否可以終止實(shí)驗(yàn)？
答：不可以，因?yàn)槿鉁梢?jiàn)的細(xì)菌濃度為10⁷CFU/ml，在此濃度一下，肉眼不能發(fā)現(xiàn)微生物生長(zhǎng)，但實(shí)際溶液中有微生物生長(zhǎng)。

問(wèn)：金黃色葡萄球菌溶血屬于哪種類(lèi)型?
答：細(xì)菌溶血的類(lèi)型可分為三種，ɑ溶血，β溶血和γ溶血。γ溶血即為不溶血， ɑ溶血和β溶血都出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，但區(qū)別在于ɑ溶血環(huán)中的紅細(xì)胞未完全溶解，而β溶血環(huán)中的紅細(xì)胞完全溶解，因此會(huì)出現(xiàn)透明的溶血環(huán)，金黃色葡萄球菌引起的溶血屬于β溶血。 

所需培養(yǎng)基試劑

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