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金黃色葡萄球菌檢驗解決方案

發(fā)布時間:2018-01-25      瀏覽次數(shù):8288    分享:

       金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在,空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此,食品受到污染的機會很多。美國疾病控制中心報告,由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位,僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生難題,在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒,占整個細菌性食物中毒的33%,加拿大則更多,占到45%,中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發(fā)生。

       一、生物學特性

       典型的金黃色葡萄球菌為球型,直徑0.5-1μm左右,顯微鏡下排列成葡萄串狀見圖1,圖2。

  

       大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡蘿卜素,使細胞團呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色,色素的產(chǎn)生取決于生長條件,故稱為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛,大多數(shù)無莢膜,革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好,需氧或兼性厭氧,最適生長溫度37℃,最適生長pH 7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起,直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性,可在10-15%NaCl肉湯中生長??煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性,VP反應(yīng)弱陽性。

       二、流行病學

       (1)季節(jié)分布,多見于春夏季;中毒食品種類多,如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外,剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%,所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說,金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品。

       (2)食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌,造成食品污染;食品在加工前本身帶菌,或在加工過程中受到了污染,產(chǎn)生了腸毒素,引起食物中毒;熟食制品包裝不嚴,運輸過程受到污染;奶?;蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r,對肉體其他部位的污染。

        三、檢測方法

       1、樣品制備: 稱取25g樣品至盛有225mL 7.5%氯化鈉肉湯中,固體樣品研磨或置均質(zhì)器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數(shù)檢驗,可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

       2、 增菌與分離培養(yǎng): 將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養(yǎng)物,分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板,血平板 36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。 金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上,菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一混濁帶,在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度,偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些,外觀可能粗糙并干燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時為白色),菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

       3、 鑒定: (1) 染色鏡檢: 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌,排列呈葡萄球狀,無芽孢,無莢膜,直徑約為0.5μm~1μm。見圖6

  

        (2) 血漿凝固酶試驗: 取0.5ml兔血漿,放入小試管,再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL~0.3mL,振蕩搖勻,置36℃±1℃培養(yǎng),每隔半小時觀察一次,連續(xù)觀察6小時,出現(xiàn)凝固即將小管傾斜或倒置,內(nèi)容物不流動,判為陽性,同時做陰陽對照見圖7。

食品中金黃色葡萄球菌檢驗程序

環(huán)凱提供金黃色葡萄球菌檢驗系列產(chǎn)品,為微生物監(jiān)控保駕護航:

金黃色葡萄球菌檢驗
用途產(chǎn)品類型貨號名稱規(guī)格
增菌干粉0240107.5%氯化鈉肉湯250g/瓶
顆粒024010P17.5%氯化鈉肉湯(顆粒型)250g/瓶
即用型24010G17.5%氯化鈉肉湯(管裝成品)10mL×10支
即用型CP07007.5%氯化鈉肉湯(袋裝成品)225mL×10袋

樣品

處理

干粉022117磷酸鹽緩沖液(PBS)250g/瓶
即用型CP0640磷酸鹽緩沖液(袋裝成品)225mL×10袋
CP0511A磷酸鹽緩沖液(瓶裝成品)225mL×6瓶
CP0630生理鹽水(袋裝成品)225ml/袋×10
樣品稀即用型CP0310生理鹽水(管裝成品)9mL×20支
分離干粉基礎(chǔ)024040Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶
添加劑029195卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(小包裝)5mL×5支(小包裝)
029192卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(大包裝)25mL×6支(大包裝)
即用型024040ABaird-Parker瓊脂平板90mm×20個/盒
干粉基礎(chǔ)024060血瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶
即用型024070血平板90mm×20個/盒
干粉CRM012金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基1000mL/瓶
即用型CRM012A金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板90mm×20個/盒

養(yǎng)

干粉024053腦心浸出液肉湯(BHI)250g/瓶
即用型024053A腦心浸出液肉湯(BHI)(管裝成品)90mm×20個/盒
干粉022020營養(yǎng)瓊脂(NA)250g/瓶
顆粒022020P1營養(yǎng)瓊脂(NA)顆粒培養(yǎng)基250g/瓶
即用型024089養(yǎng)瓊脂平板90mm×20個/盒
鑒定生化管029180凍干血漿10支/盒
產(chǎn)毒實驗試劑盒354SET01-96葡萄球菌腸毒素檢測試劑盒12條,8孔/條
核酸快速檢測/鑒定FZ004BF2金黃色葡萄球菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48test
質(zhì)控菌種陽性對照FSCC223005金黃色葡萄球菌 
陰性對照FSCC223011表皮葡萄球菌 

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