產(chǎn)品名稱：唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：Rapid Detection Kit for Burkholderia Gladiolus(Fluorescent Probe Assays)
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 規(guī)格 |
| FZ016BF2 | 48 測(cè)試/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒僅適用于食品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌的定性檢測(cè)，毒性試驗(yàn)需另按照國(guó)標(biāo)《GB4789.29-2020 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)-唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗(yàn)》開展。
檢測(cè)原理：基于Real Time PCR技術(shù)，利用針對(duì)于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應(yīng)所需試劑，加入待檢樣品即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在發(fā)生擴(kuò)增過(guò)程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號(hào)，此時(shí)熒光定量PCR儀可識(shí)別該熒光信號(hào)，同時(shí)根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，進(jìn)而判定唐菖蒲伯克霍爾德氏菌是否檢出。
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：
儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：-20℃儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
靈敏度：最低檢驗(yàn)限達(dá)到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測(cè)FAM標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機(jī)、移液器、移液槍頭及離心管等。
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
a) 食品樣品，如新鮮銀耳、米面制品及其他食品，無(wú)菌操作稱取25g（mL）樣品，置入盛有225 mL GVC 增菌液的無(wú)菌均質(zhì)袋中（鮮銀耳樣品取1 g，用剪刀剪碎，加入盛有20 mL GVC 增菌液的無(wú)菌均質(zhì)袋中），用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min~2 min；或置入盛有225 mL GVC 增菌液的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000 r/min~10000 r/min均質(zhì)1 min~2 min若樣品為液態(tài)，振蕩混勻。將上述樣品增菌液置36℃±1℃培養(yǎng)20 h~24 h；
b) 取以上增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無(wú)菌離心管中，6000 r/min離心5 min，完全去除上清；
c) 加入30 μL裂解液充分懸浮管底沉淀，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
d) 12000 r/min離心15 min，上清即為待測(cè)樣品DNA，靜置冰上，長(zhǎng)時(shí)間不用應(yīng)再次離心。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預(yù)先加有30 μL裂解液的無(wú)菌離心管中，后按照上述步驟c)、d)操作。
2, 加樣、反應(yīng)
1) 按照需求取n個(gè)PCR反應(yīng)管（n=1管陰性對(duì)照+待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入20 μL預(yù)混液，待用。
2) 向上述n個(gè)反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照、待測(cè)樣品DNA、陽(yáng)性對(duì)照各5 μL，總反應(yīng)體積為25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3) PCR反應(yīng)體系為25 μL，取FAM檢測(cè)通道，在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào)，具體程序如下：
| 反應(yīng)階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 信號(hào)收集 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 40 sec | ? |
注：在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào)，對(duì)于多通道熒光PCR儀，取熒光素“FAM”為信號(hào)采集通道，淬滅基團(tuán)選擇“None”，染料校正選擇“None”。
3, 結(jié)果：一般情況下，可通過(guò)軟件自動(dòng)設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測(cè)結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對(duì)照未出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線或Ct值＞35，陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線且其Ct值＜30。若陰陽(yáng)性對(duì)照不同時(shí)滿足上述條件，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 結(jié)果判讀 |
| ≤35 | 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌陽(yáng)性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測(cè)，若結(jié)果Ct≥37，則唐菖蒲伯克霍爾德氏菌陰性，反之則為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌陽(yáng)性。 |
| ≥37 | 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌陰性。 |
更多實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(食源性致病菌檢測(cè)系列) 產(chǎn)品列表：
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
| FZ017BF2 | 大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中致病性大腸埃希氏菌（STEC）產(chǎn)志賀毒素類型的定性檢測(cè) |
| FZ001BF2 | 銅綠假單胞菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中銅綠假單胞菌的定性檢測(cè) |
| FZ002BF2 | 糞鏈球菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中糞鏈球菌(EF)的定性檢測(cè) |
| FZ003BF2 | 產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品和水體中產(chǎn)氣莢膜梭菌的定性檢測(cè) |
| FZ004BF2 | 金黃色葡萄球菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品樣本或可疑菌落中金黃色葡萄球菌的檢測(cè) |
| FZ005BF2 | 沙門氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中沙門氏菌的檢測(cè) |
| FZ006BF2 | 志賀氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中志賀氏菌的定性檢測(cè) |
| FZ007BF2 | 單增李斯特氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中單增李斯特氏菌的檢測(cè) |
| FZ008BF2 | 副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中副溶血性弧菌的定性檢測(cè) |
| FZ009BF2 | 大腸埃希氏菌O157:H7核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中大腸埃希氏菌O157:H7 的檢測(cè) |
| FZ010BF2 | 阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中阪崎克羅諾桿菌的檢測(cè) |
| FZ011BF2 | 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測(cè) |
| FZ012BF2 | 布魯氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中布魯氏菌的檢測(cè) |
| FZ013BF2 | 溶藻弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測(cè) |
| FZ014BF2 | 創(chuàng)傷弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè) |
| FZ015BF2 | 嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于飲用水、非飲用水、公共場(chǎng)所環(huán)境樣本中嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè) |
