產(chǎn)品名稱:嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱:PCR Detection Kit for Legionella pneumophila (Fluorescent Probe Assay)
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 規(guī)格 |
FZ015BF2 | 48 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介:本試劑盒適用于飲用水、非飲用水、公共場所環(huán)境樣本中嗜肺軍團菌的檢測。
檢測原理:基于Real Time PCR技術(shù),針對嗜肺軍團菌特異性基因mip設計引物和熒光探針并優(yōu)化反應所需試劑組分,加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應。在擴增過程中,熒光探針與目的基因片段結(jié)合,可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號,此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號,同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線,進而判定嗜肺軍團菌是否檢出。
嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分:
儲存條件與保質(zhì)期:-20℃儲存,有效期為12個月,避免反復凍融。
靈敏度:最低檢驗限達到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器:熒光定量 PCR 儀(具有能夠檢測 FAM 標記的熒光通道)、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南:
1,樣品前處理
1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備:
a) 取樣過程參考國標《GB/T 18204.3-2013 公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分:空氣微生物》,或各實驗室自行建立的方法。取樣后可接種到100 mL GVPC液體培養(yǎng)基中,放置二氧化碳培養(yǎng)箱36 ℃±1 ℃培養(yǎng),增菌18~24 h;
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
c) 加入30 μL裂解液,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
d) 12000 r/min離心15 min,上清即為粗提的DNA,可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,充分懸浮于預先加有30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟c)、d)操作。
2, 加樣、反應
1) 按照需求取n個PCR反應管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),從試劑盒中取出預混液,充分融化,渦旋振蕩后短暫離心,向以上每個PCR管中加入20 μL預混液。
2) 向上述n個反應管中分別按順序加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL,加樣后立刻蓋緊管蓋,短暫離心,立即進行PCR擴增反應。
3) PCR反應體系為25 μL,設置FAM檢測通道讀取,在反應階段2中60℃時收集熒光信號,具體程序如下:
反應階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環(huán)數(shù) |
1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
60°C | 30 sec | ? |
3, 結(jié)果:一般情況下,可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結(jié)果。如需調(diào)整,可根據(jù)所使用儀器的自身情況(如噪聲等)以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制:陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值>37,陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值<30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件,則本次檢測結(jié)果無效,應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀:(根據(jù)反應所得Ct值判讀,具體見下表:)
Ct值 | 結(jié)果判讀 |
≤35 | 嗜肺軍團菌陽性。 |
35~37 | 建議重新檢測,若結(jié)果Ct≥37,則嗜肺軍團菌陰性,反之則為嗜肺軍團菌陽性。 |
≥37 | 嗜肺軍團菌陰性。 |
更多實時熒光PCR檢測試劑盒(食源性致病菌檢測系列) 產(chǎn)品列表:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
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