產(chǎn)品名稱：Circleligase Ⅱ
中文名稱：環(huán)狀連接酶
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 （點(diǎn)擊名稱進(jìn)入下單頁面） | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKM027系列 | Circleligase Ⅱ | 10次 | 50次 | 熱穩(wěn)定性環(huán)狀連接酶 | — |
| HKM027-01A | Circleligase Ⅱ | 10次 | 960 | |
| HKM027-01B | 環(huán)狀連接酶 | 50次 | 4288 |
產(chǎn)品描述：Circleligase II 是一種熱穩(wěn)定性酶，可以在沒有互補(bǔ)序列存在的情 況下催化具有 5'-磷酸基團(tuán)和 3'-羥基基團(tuán)的單鏈 DNA（ssDNA）/單 鏈 RNA (ssRNA)的自環(huán)化，該反應(yīng)不依賴于 ATP。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
?可在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下，高效催化長(zhǎng)度為 15-200nt 的 ssDNA / ssRNA 發(fā)生鏈內(nèi)環(huán)化；
?可催化單鏈底物與 5'磷酸化/腺苷酸化的單鏈 DNA 接頭連接。
產(chǎn)品用途：
1) 產(chǎn)生環(huán)狀的單鏈 DNA 分子，用于滾環(huán)復(fù)制或者滾環(huán)轉(zhuǎn)錄的實(shí) 驗(yàn)研究。
2) 用于 cfDNA/ctDNA 測(cè)序，甲基化測(cè)序等。
檢測(cè)方法：
1）連接產(chǎn)物經(jīng) 20% 聚丙烯酰胺/8 M 尿素的 PAGE 膠檢測(cè)，線 性 DNA 分子的遷移速度較環(huán)狀 DNA 分子快。
2）加入核酸外切酶 I ( Exo I )，37℃反應(yīng) 45min，線性 DNA 被 完全消化，而環(huán)狀單鏈 DNA 分子不受外切酶的影響。Exonuclease I， 能夠從 ssDNA 的 3'-OH 末端分解生成 5'-單核苷酸，對(duì) ss DNA 具 有較高的特異性，不分解雙鏈 DNA 及 RNA。
檢測(cè)結(jié)果：
圖：Circleligase II 連接結(jié)果檢測(cè)（變性 PAGE 膠）
lane1：未經(jīng) Circleligase II 和外切酶處理的 70nt 線性單鏈 DNA；
lane2：Circleligase II 處理后的 70nt 單鏈 DNA 環(huán)化產(chǎn)物；
lane3：70nt 線性單鏈 DNA 環(huán)化產(chǎn)物經(jīng) Exo I 酶切處理結(jié)果；
保存溫度：-20 ℃保存，或- 80℃長(zhǎng)期保存。
Circleligase Ⅱ 產(chǎn)品包裝：
| 產(chǎn)品組成 | A 包裝 | B 包裝 |
| Circleligase Ⅱ (100U/μl) | 1000U | 5000U |
| 5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer | 100μl | 500μl |
| 50mM Mncl? | 20μl | 100μl |
| ssDNA Control oligo（5pmol/μl） | 5μl | 5μl |
| RNase free water | 500μl | 1ml×2 |
質(zhì)量控制：所有組分經(jīng)檢測(cè)均無大腸桿菌 DNA 殘留，無核酸 內(nèi)/外切酶、磷酸酶以及 RNA 酶活性污染。
活性定義：60℃條件下，1 小時(shí)內(nèi)催化 1pmol 的標(biāo)準(zhǔn)線性單 鏈寡核苷酸（70nt，5' 磷酸化）轉(zhuǎn)換成抗核酸外切酶 I 消化的環(huán)狀結(jié)構(gòu)所需要的酶量定義為 1 個(gè)活性單位。
常用反應(yīng)體系（20μl）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Circleligase Ⅱ (100U/μl) | 1μl |
| 5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer | 4μl |
| 50mM Mncl? | 1μl |
| ssDNA | 1-10pmol |
| RNase free water | To 20μl |
注: 1) ssDNA (15-200nt 環(huán)化效率較高)應(yīng)含有 5'-磷酸基 團(tuán)和 3'-羥基基團(tuán)；
2)若實(shí)驗(yàn)有特殊需要，可縮短反應(yīng)時(shí)間至 30min， 若為復(fù)雜模板，反應(yīng)時(shí)間應(yīng)適量延長(zhǎng)或增加酶量。
反應(yīng)條件：
1×反應(yīng)緩沖液條件下，60℃溫育 1h。
80℃，10 分鐘熱失活。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKM006 | Exonuclease I |
| HKM007 | Exonuclease III |
| HKM028 | CircleLigase I Plus |
