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細菌新型生化鑒定管使用說明
―― 071820 單核增生性李斯特氏菌生化鑒定盒(10種×10次)管
一)整套試劑及用品
鑒定生化反應(yīng)的 10 種試劑(表 1)、10 瓶 0.85%無菌生理鹽水、1 瓶 1 McFarland 的濁度管、10 支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
開啟西林瓶前,用 75%酒精棉消毒西林瓶表面,在無菌條件下,按鋁蓋上的箭頭方向打開鋁蓋,撕開鋁蓋,打開西林瓶膠塞(如圖 1)。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三)單核增生李斯特氏菌生化鑒定盒的詳細使用方法法
挑取選擇性培養(yǎng)基上的可疑菌落接種木糖、鼠李糖發(fā)酵管 36±1℃培養(yǎng) 24-48h,同時接種 TSA-YE 平板 30±1℃培養(yǎng) 24-48h,純培養(yǎng)物供染色鏡檢和生化試驗。
染色鏡檢:將上述純培養(yǎng)物做革蘭氏染色并做濕片檢查;李斯特氏菌為革蘭氏陽性小桿菌,大小為 0.4~0.5μm×0.5~2.0μm;用生理鹽水制成菌懸液,在油鏡或相差顯微鏡下觀察,該菌出現(xiàn)輕微旋轉(zhuǎn)或翻滾樣的運動。
過氧化氫酶試驗:挑取TSA-YE平板上的菌落于潔凈載玻片上,滴加 1 滴 3%的過氧化氫(H2O2)溶液,李斯特氏菌呈過氧化氫酶陽性反應(yīng)。
將上述可疑菌新鮮菌苔置于已配備的無菌生理鹽水中,與 1 McFarland的濁度管比濁,將菌懸液制備成 1McFarland (約 3.0×108cfu/mL ),用吸管吸取 2 滴(約 0.06mL)菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞,一般采用全加塞(如圖 2 左兩瓶所示), 特殊情況在下表注明采用半加塞(如圖 2 右兩瓶所示),直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)(如圖 2),或放置于合適的瓶架中,于 35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),結(jié)果觀察見表 1。
注意:如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時間或培養(yǎng)方式,請詳見每種生化鑒定管附帶的使用說明。
四)單核細胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有關(guān)菌的區(qū)別見表 2。(只供參考)