產(chǎn)品名稱：2×pEC-T vector Fast Ligation Mix
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKT006-01B | 2×pEC-T vector Fast Ligation Mix | 20次×5 | T載體 | 2398 |
產(chǎn)品描述：
Easy Cloning T-vector 是一種PCR產(chǎn)物高效TA克隆的專用T載體。它由pBluescript II KS 載體改造而成：保留了pBluescript II KS 載體全部的酶切位點(diǎn)；PCR 產(chǎn)物插入位點(diǎn)處于多克隆酶切位點(diǎn)的中間，其兩側(cè)都有眾多的酶切位點(diǎn)可供選擇。
傳統(tǒng) T 載體在進(jìn)行連接時(shí)的操作程序是：載體、片段、T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在傳統(tǒng)模式上將除了插入片段的各成分進(jìn)行預(yù)混，并使其在穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)化子數(shù)目、陽(yáng)性率方面不低于傳統(tǒng)模式，使用時(shí)只需加入插入片段即可，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，降低了配制連接體系過(guò)程中的誤差和污染率，節(jié)省了時(shí)間。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
高效：快速連接，15 分鐘即可完成連接反應(yīng)。
穩(wěn)定：-20℃取出反復(fù)凍融 20 次，克隆數(shù)目及陽(yáng)性率不受影響。
快捷：只需加入插入片段再補(bǔ)充去熱源水到 10μL 體系。
使用建議：
1）連接使用的 PCR 片段 3'端應(yīng)帶有 A 末端，如果是使 用 pfu 等高保真聚合酶擴(kuò)增的不帶 A 末端的平末端片段， 不可直接用于進(jìn)行連接反應(yīng)。
2）克隆時(shí)使用的 Insert DNA 片段（PCR 產(chǎn)物）建議進(jìn)行切膠回收純化，否則 PCR 產(chǎn)物中的短片段 DNA、殘留引物等雜質(zhì)都會(huì)影響 TA 克隆效率。
3）轉(zhuǎn)化過(guò)程中建議使用Control Insert DNA做對(duì)照，以便在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí)確定原因。
保存溫度：-20℃
2×pED-T vector Fast Ligation Mix 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
質(zhì)量保證：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90% 以上含有 Insert DNA 片段。
Control Insert 經(jīng)克隆后，經(jīng)測(cè)序確認(rèn)''T''突出的存在。
操作方法：
1） 快速連接反應(yīng)體系：
| 組分 | 體積 |
| 2×pEC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反應(yīng)條件：16℃或 25℃下，保溫15至30分鐘。
注：保溫5分鐘也能正常進(jìn)行連接反應(yīng)，但反應(yīng)效率略為降低。25℃下進(jìn)行連接，其效果略差于16℃下連接效果。而更高的溫度（>26℃）則較難形成環(huán)狀DNA。
2) 取10μL加入至100μL感受態(tài)細(xì)胞中，用移液槍吹打混合，冰上放置30分鐘。
3) 將離心管置于42℃水浴中，熱激60-90秒，迅速將離心管置于冰上，放置2-3分鐘。
4) 向每個(gè)離心管中加入500μL無(wú)菌不含抗生素的LB或SOC培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘，使質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含氨芐青霉素的 LB 或SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
6） PCR 檢測(cè)，利用試劑盒自帶高速 PCR 擴(kuò)增試劑 2×FastTaq Mast Mix 直接進(jìn)行菌落PCR 鑒定。
pEC-T 結(jié)構(gòu)圖
| f1 (+) origin | 135–441 |
| LacZ alpha fragment | 451–832 |
| multiple cloning site | 653–776 |
| pUC origin | 1174–1841 |
| Amp resistance gene | 1992-2849 |
