產(chǎn)品名稱：NLS-Cas9-EGFP Nuclease
中文名稱：NLS-Cas9-EGFP 核酸酶
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKE379-01A | NLS-Cas9-EGFP Nuclease | 50μg/盒 | crispr基因編輯（核酸酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期演化過(guò)程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)。Cas9 核酸酶是一種 RNA 引導(dǎo)的內(nèi)切酶，能催化雙鏈 DNA 的斷裂,這種靶向核酸酶是高精度基因組編輯的有力工具。本制品在蛋白兩端分別加了核定位信號(hào)（NLS），在 C 端加了 EGFP 序列。
Cas9 蛋白與 Crispr/Cas9 系統(tǒng)的導(dǎo)向 RNA（sgRNA）組成一個(gè)高度穩(wěn)定的核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物。當(dāng) Cas9 帶有 NLS 表達(dá)序列時(shí),Cas9-RNP 復(fù)合體可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即定位到細(xì)胞核，無(wú)需體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯。此外，與其他系統(tǒng)相比，Cas9-RNP 復(fù)合物從細(xì)胞中迅速清除，最大限度地減少了脫靶效應(yīng)。EGFP 通過(guò)熒光激活細(xì)胞排序（FACS），使細(xì)胞群富集以進(jìn)行所需的基因組編輯，顯著降低了在基因組編輯應(yīng)用中單細(xì)胞克隆和基因分型的人工和成本。
產(chǎn)品特點(diǎn)：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時(shí)引入質(zhì)粒或病毒干擾；蛋白帶有 EGFP 標(biāo)記，更易進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率判斷和細(xì)胞富集；可顯著降低脫靶效應(yīng)。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點(diǎn) DNA 效率檢測(cè)，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點(diǎn)。
應(yīng)用實(shí)例：圖例）Cas9 Nuclease 做 DNA 片段切割活性檢測(cè)：
帶有靶位點(diǎn)的 DNA 片段為 1500bp，酶切后的片段為 1100bp 和 400bp。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長(zhǎng)期保存。
NLS-Cas9-EGFP Nuclease 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9-EGFP Nuclease(1μg/μl) | 50 μL |
| 10× Cas9 Reaction Buffer | 500μl |
| *HKE379-02 系列為 5μg/μl 濃度，共 10μl | |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清 晰單一的目的條帶，純度達(dá) 95%，內(nèi)毒素含量<100EU/mg，qPCR 方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌基因組殘 留，無(wú) RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| dsDNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9-EGFP Nuclease | 0.5-1.5 ug |
| 10× Cas9 Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE367** | Cas9（H840A）Nickase |
| HKE368*** | Cas9(D10A,H840A) Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補(bǔ)的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
***為 Cas9(D10A,H840A) Nuclease，具有靶 DNA 結(jié)合 活性， 但無(wú)切割活性，可用于陰性對(duì)照等用途。
