產(chǎn)品名稱：Top10 Competent Cell
中文名稱：top10感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKV209-01A | Top10 Competent Cell | 100μl×10支 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 281 |
產(chǎn)品描述：本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 TOP10 菌株經(jīng)特殊工藝制作得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。TOP10 是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株，其 φ80, lacZΔM15 基因產(chǎn)物可與載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) α 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。該產(chǎn)品適用于高效的質(zhì)粒 DNA 克隆，并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。
產(chǎn)品特點：
適用于高效的 DNA 克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增。
φ80, lacZΔM15 基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) α 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。
基因型：F-, mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcr BC) φ80, lacZΔM15, Δlac X74, recA1 araΔ139Δ(ara-leu) 7697, galU galK,rps, L (Strr) endA1, nupG。
轉(zhuǎn)化效率：使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
保存溫度：-70℃
Top10 Competent Cell 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| TOP10 Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的用量為 50-100μl，可根據(jù)實際情況分裝使用。所用 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞的十分之一，以下實驗以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2）待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液槍吹打混合，冰上放置 30 分鐘。
3）將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4）向每個離心管中加入 500μl 無菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘，使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布量應(yīng)根據(jù)具體實驗調(diào)整，如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板，如果預(yù)計的克隆數(shù)較少，可 3000rpm 離心 5 分鐘，吸取部分培養(yǎng)基，懸浮菌體后涂布在一個平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事項：
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中，不可反復(fù)凍融，或放置時間過長，避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
2）實驗操作時，應(yīng)注意無菌條件。
3）實驗過程中，可保留部分連接反應(yīng)液，當(dāng)轉(zhuǎn)化不成功時，可重新轉(zhuǎn)化。
