產(chǎn)品名稱：DH5α Competent Cell
中文名稱：DH5α 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKV208-01A | DH5α Competent Cell | 100μl×10支 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 281 |
產(chǎn)品描述：本制品是采用大腸桿菌 DH5α 菌株經(jīng) CaCl2 等處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于質(zhì)粒 DNA 熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α 是一種常用于 質(zhì)粒克隆的菌株，可與載體編碼 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) α 互 補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1 和 endA1 的突變有利于克DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108cfu/μg，適用于高效的質(zhì)粒 DNA 克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
φ80,lacZΔM15 基因產(chǎn)物可與 pUC19 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) α 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。
recA1 和 endA1 的突變有利于克隆 DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取。
基因型：F-,φ80,lacZΔM15,Δ(lacZYA-argF) U169, endA1, recA1, - + - hsdR17(rk ,mk ),SupE44,λ ,gyrA96, relA1,phoA。
轉(zhuǎn)化效率：使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率≥1×10?cfu/μg。
保存溫度：-70℃
DH5α Competent Cell 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| DH5α Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的用量為 50-100μl，可根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。所用 DNA 的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞的十分之一，以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2）待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液槍吹打混合，冰上放置30 分鐘。
3）將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4）向每個(gè)離心管中加入 500μl 無(wú)菌不含抗生素的LB 或 SOC 培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘，使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。涂布量應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整，如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板，如果預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可 3000rpm 離心5 分鐘，吸取部分培養(yǎng)基，懸浮菌體后涂布在一個(gè)平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事項(xiàng)：
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中，不可反復(fù)凍融，或放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
2）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，應(yīng)注意無(wú)菌條件。
3）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，可保留部分連接反應(yīng)液，當(dāng)轉(zhuǎn)化不成功時(shí)，可重新轉(zhuǎn)化。
