HKE031系列 Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)
英文名稱:Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)
貨 號 :HKE031系列
規(guī) 格 :250U | 250U ×5
用途:用于要求保真度比較高的PCR反應
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產品名稱:Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)
中文名稱:快速Pfu DNA聚合酶(with dNTP)
產品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 產品名稱 | 規(guī)格 | 產品介紹 | 產品價格 |
HKE031-01A | Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP) | 250U | 快速Pfu DNA聚合酶 | |
HKE031-01B | 250U ×5 | |||
HKE031-02A | Fast Pfu DNA Polymerase | 250U | ||
HKE031-02B | 250U ×5 |
產品描述:本制品是通過采用分子進化技術對普通Pfu酶進行改造而獲得的 新型Fast Pfu酶,是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶解決了高保真PCR反應中Pfu酶擴增靈敏度低、延伸速度緩慢的難題,能夠高效、快速擴增≤6kb片段目的基因片段(最長可達20kb),模板低至0.05ng, 并且在DNA末端補平、全基因合成、引入突變等之中有著很好的應用。
產品特點:
高保真:保真度高于Pfu酶,為普通Taq酶的50倍。
快速高效:Fast Pfu擴增速度為普通Pfu酶的數倍,72℃保溫30秒可延伸1kb以上。擴增長度可達20kb,能高效擴增≤6kb片段。
高靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出1.2kb特定基因片段,擴增性能顯著優(yōu)于普通Pfu酶。
獨特配方的 5×Buffer:使PCR 擴增反應更加穩(wěn)定、靈敏、高效。
產品用途:用于要求保真度比較高的PCR反應,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成、DNA末端補平等,也用于復雜模板, 高GC/AT 模板的擴增。
使用建議:(Fast Pfu DNA聚合酶產生的PCR產物為平末端,無3′端"A"突出, 除使用環(huán)凱PCR一步定向克隆試劑盒(Cat. No: HKNR001)外, 其它PCR 產物的克隆方案有:)
1)PCR前引物進行5′端加磷修飾或將PCR產物磷酸化處理后再直接克隆于平末端的載體中。
2)將產物3′末端加A后再與T載體連接。
3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度,理想的引物長度為20~30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配制反應體系,并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。
應用實例:圖例一)50μL 擴增體系中,λDNA 為模板,擴增 1kb~20kb 片段。
泳道 M:λ/Hind III DNA Marker;
泳道 1:1kb;
泳道 2:2kb;
泳道 3:4kb;
泳道 4:6kb;
泳道 5:8kb;
泳道 6:10kb;
泳道7:12kb;
泳道 8:20kb
保存溫度:-20℃。
產品包裝(A 包裝):
活性定義:在74℃條件下,30 分鐘內催化 10nmol dNTPs 摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。。
常用反應體系(50μL):
常用PCR 循環(huán):
注意事項:
1)對高 GC 含量模板,建議將變性溫度提高到 98℃。
2)對于高 GC 模板,建議配套使用 PCR 增強劑 I(Cat. No: HKE050)和 PCR 增強劑 II(Cat. No: HKE051),或者添加終濃度為 5%-8% DMSO。