微生物檢測(cè)凍干質(zhì)控菌種大腸埃希氏菌O157:H7使用說(shuō)明
1、 復(fù)蘇大腸埃希氏菌O157:H7質(zhì)控菌種前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)及無(wú)菌條件下進(jìn)行。
2、 啟開(kāi)大腸埃希氏菌O157:H7質(zhì)控菌種前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無(wú)菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)塑蓋，撕開(kāi)鋁蓋，打開(kāi)西林瓶膠塞，加入復(fù)蘇液（購(gòu)買(mǎi)菌株包裝中提供），將大腸埃希氏菌O157:H7凍干菌種（干粉）制成懸浮液，然后用無(wú)菌滴管或移液器吸取適量，移至非選擇性固體培養(yǎng)基平板（或液體培養(yǎng)基）上（除特殊情況或特別推薦外），按推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)和傳代保存（詳見(jiàn)附表“凍干菌種的復(fù)蘇培養(yǎng)和傳代保存”）。
3、 有個(gè)別凍干菌種（如弧菌屬、乳桿菌屬等）復(fù)蘇速度較慢，可按2操作后，同時(shí)將菌懸液置推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)過(guò)夜，再選用適合大腸埃希氏菌O157:H7生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離，操作見(jiàn)4。
4 、培養(yǎng)后觀察菌種的生長(zhǎng)情況，并檢查其純度，如發(fā)現(xiàn)純度不能滿足要求時(shí)，應(yīng)選用適合大腸埃希氏菌O157:H7生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并按推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)后觀察目標(biāo)菌的菌落特征與生化特征，挑取典型菌落做純培養(yǎng)后再使用。
5、 本品為一次性用品，開(kāi)啟之后不宜反復(fù)使用或保存，暫不使用時(shí)，建議4℃保藏。
6、 復(fù)蘇后的菌種一般宜傳代（如:斜面?zhèn)鞔?～3次后使用，菌種傳代5次后建議棄置。
7 、大腸埃希氏菌O157:H7質(zhì)控菌種購(gòu)買(mǎi)后應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用。
注）：購(gòu)買(mǎi)后如發(fā)現(xiàn)菌種異?；蛭廴镜惹闆r，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買(mǎi)之日起1個(gè)月內(nèi)與我們聯(lián)系。
凍干菌種大腸埃希氏菌O157:H7復(fù)蘇示意圖：
附表 凍干質(zhì)控菌種的復(fù)蘇培養(yǎng)和傳代保存
稱(chēng) | 復(fù)蘇液 （包裝中提供） | 復(fù)蘇培養(yǎng)基 | 培養(yǎng)條件 | 保存溫度 | 轉(zhuǎn)接 頻率 | 備注 |
大腸埃希氏菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂（022020） | 24h～48h | 2~ | 一個(gè)月 |
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阪崎腸桿菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌 | ||||||
肺炎克雷伯氏菌、粘質(zhì)沙雷伯氏菌 | ||||||
變形桿菌、弗氏檸檬酸桿菌 | ||||||
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 | ||||||
葡萄球菌、微球菌、馬紅球菌、芽胞桿菌 | ||||||
假單胞菌、氣單胞菌屬 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂（022020） | 24h～48h | 一個(gè)月 |
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熒光假單胞菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂（022020） | 25℃-30℃ 24h～48h | 一個(gè)月 |
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腸球菌、鏈球菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 血平板（024070） | 24h～48h | 2~ | 半個(gè)月 |
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李斯特氏菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂 (TSA-YE) (026020) | 24h～48h | 2~ | 一個(gè)月 |
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梭菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 皰肉牛肉粒肉湯（027140）或梭菌増菌肉湯（027145）或哥倫比亞血平板（CP0160） | 48h～72h厭氧培養(yǎng) | 2~8℃ 厭氧環(huán)境 | 半個(gè)月 | 接種皰肉牛肉粒肉湯后加無(wú)菌液體石蠟（029110）高約1cm。 |
霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌 | 堿性蛋白胨水 | 堿性瓊脂（025040） | 24h～48h | 一個(gè)月 |
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其它弧菌(副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌等) | 3％NaCl堿性蛋白胨水 | 3％NaCl 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 或3％NaCl TSA （025043） | 24h～48h | 一個(gè)月 |
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霉菌、念珠菌、酵母菌 | 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 | 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)(021050) | 2d～5d | 2~ | 兩個(gè)月 |
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空腸彎曲菌 | 布氏肉湯 | 血平板（024070） 42± | 42± | 2~ 微需氧 | 一周 |
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雙歧桿菌 | TPY肉湯 | 雙歧桿菌瓊脂（027330） | 48h～72h厭氧培養(yǎng) | 2~ 厭氧環(huán)境 | 一周 |
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其它乳酸菌(乳酸桿菌、乳酸桿菌亞種、嗜熱乳酸鏈球菌) | MRS肉湯或脫脂乳溶液 | 滅菌脫脂乳或 MRS瓊脂（027315） | 24h～48h | 2~ | 一周 |
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嗜血桿菌屬、奈瑟氏菌屬 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 巧克力平板培養(yǎng)基 (普通)(029032) | 48h～72h 5～10%CO2環(huán)境 | 2~ 5~10%CO2 環(huán)境 | 一周 |
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軍團(tuán)菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | BCYE平板 (CP0020) | 4d～7d | 2~ | 一個(gè)月 | 轉(zhuǎn)接時(shí)用一次性接種環(huán)，不能使用酒精燈；如使用平板轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)時(shí)建議用牛皮紙或報(bào)紙包好，避免平板失水變干。 |
